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| TGF-b1和smad4mRNA在慢性肝炎、肝硬化、肝癌癌旁组织的表达及意义 |
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TGF-b1和smad4mRNA在慢性肝炎、肝硬化、肝癌癌旁组织的表达及意义 |
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| 作者：佚名 文章来源：世界华人消化杂志 点击数： 更新时间：2004-11-1 15:18:42 |
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in 3次; 滴加生物素化山羊抗兔IgG，37 °C 20 min，0.1 mol/L PBS洗2 min 3次; 滴加SABC37 °C 20 min，0.1 mol/L PBS洗5 min 4次; DAB显色8-12 min. 光镜下观察染色结果满意后水洗终止，苏木素复染，盐酸乙醇分化，自来水返蓝，凉干，中性树脂封片. 浏览全片，由于肝穿组织少而狭长(0.8-1.5 cm×0.1 cm)，仅显示1-3个汇管区，故选取阳性细胞数最集中的汇管区、肝窦及纤维条索周边等部位，连续观察5个高倍镜视野. TGF-b1阳性结果[15]以组织细胞胞质中出现棕黄色颗粒为阳性，阳性细胞数>=10%为＋，<10%为－.
1.2.2 smad4mRNA的检测 采用原位杂交检测方法. 切片厚度6 mm，以病毒性肝炎smad4阳性片为阳性对照片，以PBS缓冲液代替杂交液作为阴性对照，具体步骤如下:6mm厚石蜡切片捞片于POLY-LYSINE及10 g/L DEPC预处理后的载玻片上，置烤箱65 °C 60 min; 脱蜡; 梯度乙醇至水; 30 mL/L柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(10:1)，37 °C消化30 min，10 g/L DEPC处理的0.5 mol/L PBS洗5 min 3次，10 g/L DEPC双蒸水洗5 min１次，滴加预杂交液37 °C 3 h，滴加杂交液，盖上封口膜41 °C孵育大于16 h，杂交后在上一页 [1] [2] [3] [4] [5] [6] [7] [8] [9] [10] ... 下一页 >>
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