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TT病毒在肝病患者的感染状况及致病性 |
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| 作者：佚名 文章来源：世界华人消化杂志 2002年10月15日;10(10):1 点击数： 更新时间：2002-10-31 13:43:43 |
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bsp; ORF1引物为N22 区 引 物，半 巢 式PCR 方 法 检 测.外引物为PT1：5'-CAGACAGAGGAGAAGGCAAC-3’(nt1901-1920),PT2：5’-CCTCCTGGCATTTT-ACCATT-3’(nt2170-2190) ;内引物：PT3:5’-GYTRTGGATAGACTGG-3’(nt1918-1938) ；反义引物为PT2非翻译区引物，用巢式PCR方 法 检 测，引物设计参考TA278等9个TTV全基因,近全基因序列，在非翻译区选择最保守区域设计引物.外引物为T1：5’-GCACTTCCGAATGGCTGAGTTTTC-3' (TA278 nt97-120)T4：5’-GCCAGTCCCGAGCCCGAATTG
CC-3’(TA278 nt233-211) ；内引物为T2:5'-CTGAGTTTT CCACGCCCGTCCGC-3’(TA278nt111-133),T3:5’-AGCCCGAATTGCCCCTGAC-3’(TA278 nt223-204).PCR反应： ORF1引物及UTR引物均进行2次PCR.UTR引物PCR每10份PCR标本之间增设一阴性对照.选择UTR引物及ORF1引物纯化PCR产物各5份，送上海生工生物工程公司测序.TTV分型根据限制性内切酶片段长度多态性分析方法(RFLP)对ORF1引物 PCR反应产物(第2次PCR阳性产物273 bp)进行酶切分型.所用内切酶分别为NdeI,PstI,MseI,NlaII. 酶切方法：20 mL反应体系,2 U内切酶,5 m LPCR产物及dH上一页 [1] [2] [3] [4] [5] [6] [7] [8] [9] [10] ... 下一页 >>
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